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檢驗技師考點:IgG純化
鹽析法只能部分純化抗體,更高純度的抗體制劑可用層析法制備。IgM五聚體相對分子質量達9.7×10,比血清中任何其他蛋白都大,用分子篩層析很容易將其純化。IgG在PH 8.0時帶負電荷,能與DEAE纖維素上的陽離子結合,因此可用離子交換層析來純化IgG.IgG純化最常用的方法為親和層析。IgG與葡萄球菌A蛋白和鏈球菌G蛋白具合高度的親和性,可用這兩種蛋白質交聯親和層析柱將IgG純化。大部分IgG與蛋白A結合PH為8—9,洗脫PH為2—4;而與蛋白G的結合PH為5—7,洗脫PH為9—10.C蛋白更適合于IgG的純化,不但反應條件為溫和的弱酸性或弱堿性,并且與IgG的結合力高于A蛋白。G蛋自能與大部分動物種類的IgG結合,而A蛋白對小鼠IgG1、大鼠IgG2b、人IgG3、馬和綿羊IgG結合力弱或不能結合G蛋白和A蛋白均不能與雞IgG結合。
生理作用:
IgG的功能作用主要在機體免疫中起保護作用,大多數抗菌、抗病毒;應對麻疹、甲型肝炎等,能有效地預防相應的感染性疾病。
IgG是唯一可以通過胎盤的免疫球蛋白。來自母體的IgG在出生后數月對防御白喉、麻疹、脊髓灰質炎等感染起著重要作用,母體傳遞給胎兒的IgG于生后6個月幾乎全部消失,而嬰兒自身產生IgG從3個月時才逐漸增多,故6個月后易患感染。3-5歲是漸接近成人水平。
生理性變化:
胎兒出生前可從母體獲得IgG,在孕前期22~28周間,胎兒血IgG濃度與母體血IgG濃度相等,出生后母體IgG逐漸減少,到第3、4月胎兒血IgG降至最低,隨后胎兒逐漸開始合成IgG,血清IgG逐漸增加,到16歲前達到成人水平。
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