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臨床免疫檢驗常用的分析技術
臨床免疫檢驗常用的分析技術有哪些你知道嗎?下面是yjbys小編為大家?guī)淼呐R床免疫檢驗常用的分析技術的知識,歡迎閱讀。
一、免疫標記技術:2種分類
1.(1) 免疫組化技術(immunohistochemical technique): 用于組織切片或其他標本中抗原抗體的定位(2)免疫測定(immunoassay): 用于液體標本中抗原或抗體的測定.
2.(1) 免疫熒光技術 (2) 酶免疫技術 (3) 放射免疫技術(4) 金標技術(5)化學發(fā)光技術
酶免疫技術—固相酶免疫技術―酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)
ELISA方法類型與操作步驟
雙抗體夾心法:檢測抗原最常用的方法
原理(操作步驟): (1) 特異性抗體包被載體形成固相抗體. (2) 洗去未結(jié)合的抗體和雜質(zhì). (3) 加入待測樣品,使其中相應抗原和固相抗體呈特異性結(jié)合成復合物. (4) 再洗滌除去未結(jié)合的物質(zhì).(5) 加酶標抗體,使之與固相上的抗原呈特異性結(jié)合.(6) 經(jīng)充分洗滌后除去未結(jié)合的游離酶標記抗體.(7) 加入相應酶的底物,固相化的酶催化底物變成有色產(chǎn)物,顏色反應的程
度與固相上抗原的量有關.
適用范圍:檢測抗原的最常用方法 ,用此方法檢測的抗原,應至少有2個以上結(jié)合位點,故不能用以測定半抗原物質(zhì)。
2、競爭法:(可用于測定抗原或抗體)
原理(操作步驟):以測定抗原為例(1) 將特異性抗體包被載體,使形成固相抗體,(2) 洗去雜質(zhì),待測孔中同時加待測標本和酶標記抗原,使之與固相抗體反應。如待測標本中含有抗原,則與酶標記抗原共同競爭結(jié)合固相抗體。待測標本中抗原量越多,酶標記抗原結(jié)合量越少(3) 洗滌除去游離酶標記物后,加底物顯色(4) 結(jié)果是不含受檢抗原的對照孔,其結(jié)合的酶標記抗原最多,顯色最深。對照孔與待測孔顏色深度之差代表受檢標本中的抗原量。待測孔越淡, 標本中抗原量越多。
3、間接法:(可檢測各種相應抗體)
原理(操作步驟):(1) 將特異性抗原包被載體,使形成固相抗原; (2) 洗去未結(jié)合的物質(zhì),加入待測樣品,使其中待測的特異性抗體與固相抗原相結(jié)合形成固相抗原抗原復合物;(4)再經(jīng)洗滌后,固相上僅留下特異性抗體; (5) 加酶標抗人球蛋白(酶標抗抗體),使與固相復合物中抗體結(jié)合,從而使待測抗體間接標記上酶;(6) 洗滌除去多余的酶標抗體,固相結(jié)合酶量就代表待測抗體的量; (7) 最后加入底物顯色,其顏色深淺可代表待測抗體量。
免疫熒光法---抗核抗體的檢測
二、沉淀反應
可溶性抗原與相應抗體特異性結(jié)合所出現(xiàn)的反應。反應分為兩個階段:(1) 抗原抗體特異性結(jié)合;(2) 形成可見的免疫復合物。
三、凝集反應
細菌和紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結(jié)合后,出現(xiàn)肉眼可見的凝集(agglutination)現(xiàn)象。
凝集反應的發(fā)生分為兩個階段:(1)抗原抗體的特異結(jié)合;(2)出現(xiàn)可見的顆粒凝聚。
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