公衛執業醫師《醫學微生物學》弧菌屬知識

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2017年公衛執業醫師《醫學微生物學》弧菌屬知識

　　弧菌屬(Vibrio)細菌是一大群菌體短小，彎曲成弧形的革蘭陰性菌，本菌屬與腸桿菌科的主要不同點是氧化酶試驗陽性(麥契尼可夫弧菌除外)和有一根位于菌體一端的單鞭毛。弧菌屬是公衛執業醫師考試醫學微生物學的知識點。下面是yjbys小編為大家帶來的關于弧菌屬的知識，歡迎閱讀。

2017年公衛執業醫師《醫學微生物學》弧菌屬知識

　　第一節霍亂弧菌

　　霍亂弧菌(V.cholerae)是引起烈性傳染病霍亂的病原體，二千多年前已有記載。自1817年以來，已發生過7次世界性霍亂大流行，前6次均由霍亂弧菌古典生物型引起，1961年開始的第7次大流行由霍亂弧菌El Tor生物型引起。1992年一個新的流行株O139(Bengal)在沿孟加拉彎的印度和孟加拉一些城市出現，并很快傳遍亞洲，這是首次由非O1群霍亂弧菌引起的流行。

　　一、生物學性狀

　　形態與染色霍亂弧菌菌體大小為0.5～0.8´1.5~3mm。從病人新分離出的細菌形態典型，呈弧型或逗點狀(圖10-1)。但經人工培養后，細菌常呈桿狀而不易與腸道桿菌區別。革蘭染色陰性。特殊結構有菌毛，無芽胞，有些菌株(包括O139)有莢膜，在菌體一端有一根單鞭毛。若取病人米泔水樣糞便或培養物作懸滴觀察，細菌運動非常活潑，呈穿梭樣或流星狀。

　　培養特性與生化反應兼性厭氧，營養要求不高。生長繁殖的溫度范圍廣(18~37°)，故可在外環境中生存。耐堿不耐酸，在pH8.8~9.0的堿性蛋白胨水或堿性瓊脂平板上生長良好，因其它細菌在此pH中不易生長，故初次分離霍亂弧菌常用堿性蛋白胨水增菌。霍亂弧菌可在無鹽環境中生長，而其它致病性弧菌則不能。霍亂弧菌為過氧化氫酶陽性，氧化酶陽性，能發酵很多常見的單糖、雙糖和醇糖，如葡萄糖、蔗糖和甘露醇，產酸不產氣;不分解阿拉伯膠糖;能還原硝酸鹽，吲哚反應陽性。

　　抗原構造與分型霍亂弧菌有耐熱的0抗原和不耐熱的H抗原。根據0抗原不同，現已有155個血清群，其中O1群、O139群引起霍亂，其余的血清群分布于地面水中，可引起人類胃腸炎等疾病，但從未引起霍亂的流行。H抗原無特異性，免疫擴散試驗表明所有霍亂弧菌擁有相同的H抗原。

　　O1群霍亂弧菌根據其菌體抗原由3種抗原因子A、B、C組成，又可分為3個血清型：小川型(Ogawa)、稻葉型( Inaba)、和彥島型(Hikojima)(表10-1)。

　　表10-1 霍亂弧菌O1群血清型

#FormatImgID_0# 血清型（抗原組分）	O1多克隆抗體	O1單克隆抗體 A B C			出現頻率	造成流行
小川型（AB）	+	+	+	-	常見	是
稻葉型（AC）	+	+	-	+	常見	是
彥島型（ABC）	+	+	+	+	極少見	未知

　　“+” 凝集; “-”不凝集

　　根據表型差異，O1群霍亂弧菌的每一個血清型還可分為2個生物型，即古典生物型(classical biotype)和El Tor生物型(El Tor biotype)因在埃及西奈半島El Tor檢疫站首次分離出而命名)。古典生物型不溶解羊紅細胞，不凝集雞紅細胞，對50IU的多粘菌素敏感，可被第IV群噬菌體裂解，而El Tor弧菌則完全相反。

　　O139群在抗原性方面與O1群之間無交叉，序列分析發現O139群失去了O1群的0抗原基因，出現了一個約36 kb的新基因，編碼與O1群不同的脂多糖抗原和莢膜多糖抗原，但與O22和O155等群可產生抗原性交叉。在遺傳性方面，如核糖型，限制性酶切電泳圖譜，外膜蛋白，毒性基因等則與O1群的古典型和El Tor生物型的流行株相似。

　　抵抗力 El Tor生物型和其它非01群霍亂弧菌在外環境中的生存力較古典型為強，在河水、井水及海水中可存活1~3周，有時還可越冬。本菌不耐酸，在正常胃酸中僅能存活4分鐘。55°C濕熱15分鐘，100°C煮沸1~2分鐘，0.5ppm氯15分鐘能殺死霍亂弧菌。以1：4比例加漂白粉處理病人排泄物或嘔吐物,經1小時可達到消毒目的。

　　二、致病性

　　致病物質霍亂弧菌的致病物質涉及到染色體上多個基因，它們主要包括由ToxR蛋白調控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基因，另外還有二個不受ToxR蛋白調控的毒力因子基因hlyA和hap。

　　1.霍亂腸毒素是目前已知的致瀉毒素中最為強烈的毒素，是腸毒素的典型代表。由一個A亞單位(分子量為27.2kDa)和5個相同的B亞單位(每個亞單位分子量為11.7kDa)構成的一個熱不穩定性多聚體蛋白，分別由結構基因ctx(cholera toxin)A和ctxB編碼。ctxAB操縱子位于染色體上稱作核心區的部位，核心區的兩端為重復序列(RS1)。霍亂弧菌古典生物型染色體上廣泛散布著以2拷貝ctx為一組的CTX單元，。El Tor生物型染色體上CTX則為多拷貝隨機分布。B亞單位可與小腸粘膜上皮細胞GM1神經節苷脂受體結合，介導A亞單位進入細胞，A亞單位在發揮毒性作用前需經蛋白酶作用裂解為A1和A2兩條多肽。A1作為腺苷二磷酸核糖基轉移酶可使NAD(輔酶I)上的腺苷二磷酸核糖轉移到G蛋白上，稱GS，GS的活化可使細胞內cAMP水平升高，主動分泌Na+、K+、HCO3—和水，導致嚴重的腹瀉與嘔吐。

　　此外，在ctx操縱子上游還存在兩個編碼毒性相關的zot (zonula occludens toxin ，小帶聯結毒素) 、ace (accessory cholera enterotoxin)基因。在實驗兔中，其編碼產物Zot能增加腸粘膜的通透性;Ace使結扎的回腸段中液體聚積。志愿者口服ctxAB缺失的基因工程變異株產生的輕度腹瀉可能與這二個毒性基因有關。

　　2.鞭毛、菌毛及其它毒力因子霍亂弧菌活潑的鞭毛運動有助于細菌穿過腸粘膜表面粘液層而接近腸壁上皮細胞。細菌的普通菌毛是細菌定居于小腸所必須的因子。只有粘附定居后方可致病。與此相關基因有acf和 tcpA。acf (accessory colonization factor) 編碼粘附素; tcpA (toxin coregulated pilus A) 編碼菌毛蛋白中一個分子量為20.5kDa的重要亞單位。實驗發現使tcp失活后，變異株即失去定居功能和致瀉特性。其他毒力因子還有hlyA(hemolytic-cytolytic A)基因編碼的具有溶血-溶細胞的蛋白;hap(hemagglutinin/protease)基因編碼的有助于細菌從死亡細胞上解離的血凝素/蛋白酶。

　　O139群除具有上述O1群的致病物質和相關基因外，還存在多糖莢膜和特殊LPS毒性決定簇，其功能是抵抗血清中殺菌物質和能粘附到小腸粘膜上，不表達LPS決定簇和莢膜的TnphoA突變株則對血清易感。

　　所致疾病引起烈性腸道傳染病霍亂，為我國的甲類法定傳染病。在自然情況下，人類是霍亂弧菌的唯一易感者。在地方性流行區，除病人外，無癥狀感染者也是重要傳染源。傳播途徑主要是通過污染的水源或食物經口攝入，人與人之間的直接傳播不常見。在正常胃酸條件下，需要進入大量的細菌(108 )方能引起感染，但當胃酸低時，感染劑量可減少到103~105個細菌。病菌到達小腸后，粘附于腸粘膜表面并迅速繁殖，不侵入腸上皮細胞和腸腺，細菌在繁殖過程中產生腸毒素而致病。O1群霍亂弧菌感染可從無癥狀或輕型腹瀉到嚴重的致死性腹瀉，霍亂弧菌古典生物型所致疾病較El tor生物型嚴重。典型病例一般在吞食細菌后2~3天突然出現劇烈腹瀉和嘔吐，在疾病最嚴重時，每小時失水量可高達1升，排出如米泔水樣腹瀉物。由于大量水分和電解質喪失而導致失水，代謝性酸中毒，低堿血癥和低容量性休克及心力不齊和腎衰竭，如未經治療處理，病人死亡率高達60%，但若及時給病人補充液體及電解質，死亡率可小于1%。O139群霍亂弧菌感染比O1群嚴重，表現為嚴重脫水和高死亡率，又成人病例所占比例較高〈70%，而O1群霍亂弧菌流行高峰期，兒童病例約占60%。

　　病愈后一些患者可短期帶菌，一般不超過2周，個別El Tor型病例病后可帶菌長達數月或數年之久。病菌主要存在于膽囊中。

　　三、免疫性

　　對O1群霍亂弧菌感染的研究和歷次霍亂流行的觀察，表明感染霍亂弧菌后，機體可獲得牢固免疫力，再感染少見。病人發病數月后，血液中和腸腔中可出現保護性的抗腸毒素抗體及抗菌抗體，抗腸毒素抗體主要針對霍亂毒素B亞單位，抗菌抗體主要針對O抗原。腸腔中的sIgA可凝集粘膜表面的病菌，使其失去動力;可與菌毛等粘附因子結合，阻止霍亂弧菌粘附至腸粘膜上皮細胞;可與霍亂腸毒素B亞單位結合，阻斷腸毒素與小腸上皮細胞受體作用。霍亂弧菌引起的腸道局部粘膜免疫是霍亂保護性免疫的基礎。

　　感染O139群的病人大多為成年人，表明以前感染O1群獲得的免疫對O139群感染無交叉保護作用。O139群感染后的`免疫應答與O1群基本一致。家兔腸道結扎實驗和小鼠攻擊實驗證明，O139群的保護性免疫以針對脂多糖和莢膜多糖的抗菌免疫為主，抗毒素免疫為輔。O1群的脂多糖O抗原與O139群存在顯著差異，且還缺少莢膜多糖表面抗原，故其引起的免疫不能交叉保護O139群的感染。

　　四、微生物學檢查法

　　霍亂是烈性傳染病，對首例病人的病原學診斷應快速、準確，并及時作出疫情報告。

　　標本病人糞便，肛拭;流行病學調查還包括水樣。霍亂弧菌不耐酸和干燥。為避免因糞便發酵產酸而使病菌滅活，標本應及時培養或放入Cary-Blair保存液中運輸;腸道病原菌常用的甘油鹽水緩沖保存液不適宜。

　　直接鏡檢革蘭染色陰性弧菌，懸滴法觀察細菌呈穿梭樣運動有助于診斷。

　　分離培養常將標本首先接種至堿性蛋白胨水增菌，37°C孵育6-8小時后直接鏡檢并作分離培養。目前常用的選擇培養基為TCBS，該培養基含有硫代硫酸鹽、枸櫞酸鹽、膽鹽及蔗糖，霍亂弧菌因分解蔗糖呈黃色菌落。挑選可疑菌落進行生化反應及與O1群多價和單價血清作玻片凝集反應。目前還需與O139群抗血清做凝集反應。其它分離培養基還有堿性平板、血平板和TTGA培養基等。

　　五、防治原則

　　改善社區環境，加強水源管理;培養良好個人衛生習慣，不生食貝殼類海產品等是預防霍亂弧菌感染和流行的重要措施。

　　疫苗預防長期以來使用O1群霍亂弧菌死菌苗肌肉注射，雖可增強人群的特異性免疫力，但保護力僅為50%左右，且血清抗體持續時間較短，僅為3~6個月。在認識到腸道局部免疫對霍亂預防起主要作用后，目前霍亂疫苗預防的重點已轉至研制口服菌苗的方向上，包括B亞單位-全菌滅活口服疫苗、基因工程減毒活菌苗(用基因工程技術去除O1群霍亂弧菌野生株DNA中大部分毒力基因的活疫苗)、帶有霍亂弧菌幾個主要保護性抗原的基因工程疫苗等。其中前兩種疫苗已進行過大規模人群試驗，對其有效保護率和保護時間正在進行評估，且在某些國家已獲準使用。0139尚無預防性疫苗，候選菌苗正在研制中，思路是制成包括預防O1群和O139群霍亂弧菌感染的二價菌苗。

　　及時補充液體和電解質，預防大量失水導致的低血容量性休克和酸中毒是治療霍亂的關鍵;抗生素的使用可減少外毒素的產生，加速細菌的清除，用于霍亂的抗菌藥物有四環素、強力霉素、呋喃唑酮、氯霉素和復方SMZ-TMP等。但帶有多重耐藥質粒的菌株在增加;且O139群的耐藥性強于O1群，給治療帶來一定困難。

　　第二節副溶血性弧菌

　　副溶血性弧菌(V。parahemolyticus)于1950年從日本一次暴發性食物中毒中分離發現。該菌存在于近海的海水、海底沉積物和魚類、貝殼等海產品中。根據菌體O抗原不同，現已有13個血清群。主要引起食物中毒，尤以日本、東南亞、美國及我國臺北地區多見，也是我國大陸沿海地區食物中毒中最常見的一種病原菌。

　　生物學特性同其它引起人類感染的弧菌種類一樣，該菌與霍亂弧菌的一個顯著差別是嗜鹽(halophilic)，在培養基中以含3.5%NaCl最為適宜，無鹽則不能生長，但當NaCl濃度高于 8%時也不能生長。在鹽濃度不適宜的培養基中，細菌呈長桿狀或球桿狀等多形態。不耐熱，90°C1分鐘即被殺死;不耐酸，1%醋酸或50%食醋中1分鐘死亡。

　　副溶血性弧菌在普通血平板(含羊、兔或馬等血液)上不溶血或只產生a溶血。但在特定條件下，某些菌株在含高鹽(7%)的、人O型血或兔血及以D-甘露醇作為炭源的我妻(Wagatsuma)瓊脂平板上可產生b溶血，稱為神奈川現象(Kanagawa phenomenon,KP)。日本學者檢測了3370株副溶血性弧菌，來自病人的菌株中96.5%為KP+，而來自海產品及海水的菌株僅1%陽性。

　　致病性引起食物中毒的.確切致病機制尚待闡明。KP+菌株為致病性菌株基本肯定。現已從KP+菌株分離出二種致病因子，其一為耐熱直接溶血素(thermostable direct hemolysin ,TDH),動物實驗表明具有細胞毒和心臟毒兩種作用。其基因為雙拷貝(tdh1和tdh2)，KP實驗中的溶血現象即由tdh2位點決定。最近的研究還表明，tdh基因家族也廣泛存在于人類致病性弧菌中，如大多數霍利斯弧菌菌株(V.hollisae)，某些擬態弧菌菌株(V.mimicus)中有tdh基因，非O1群霍亂弧菌中也存在同源性約為93%~96%的tdh相關基因，提示該基因與致病關系密切。另一個致病因子為耐熱相關溶血素( thermostable related hemolysin TRH)生物學功能與TDH相似，其基因與 tdh同源性為68%。

　　其它致病物質可能還包括粘附素和粘液素酶。

　　該菌引起的食物中毒經烹飪不當的海產品或鹽腌制品所傳播。常見的為海蟄、海魚、海蝦及各種貝類，因食物容器或砧板生熟不分污染本菌后，也可發生食物中毒。該病常年均可發生，潛伏期5~72小時，平均24小時，可從自限性腹瀉至中度霍亂樣病癥，有腹痛、腹瀉、嘔吐和低熱，糞便多為水樣，少數為血水樣，恢復較快，病后免疫力不強，可重復感染。

　　該菌還可引起淺表創傷感染、敗血癥等。

　　診斷與防治

　　標本采取患者糞便、肛拭或剩余食物，直接分離培養于SS瓊脂平板或嗜鹽菌選擇平板。如出現可疑菌落，進一步作嗜鹽性試驗與生化反應，最后用診斷血清進行鑒定。最近已發展了基因探針雜交及PCR快速診斷法，可直接從原始食物標本或腹瀉標本中檢測耐熱毒素基因。

　　治療可用抗菌藥物，如慶大霉素或復方SMZ -TMP，嚴重病例需輸液和補充電解質。

　　例題：

　　1.細菌性痢疾的病原體屬于

　　A、志賀菌屬

　　B、沙門菌屬

　　C、弧菌屬

　　D、彎曲菌屬

　　E、螺旋菌屬

　　2.細菌性痢疾散發流行的主要途徑是