香連素片質量標準研究論文

香連素片質量標準研究論文

　　香連素片是廣東萬年青制藥無限公司的產品，具有清熱燥濕、行氣止痛的成效，臨床用于干冷型痢疾、里急后重、腹痛泄瀉。本文是一篇香連素片質量規范研討，讓我們一同來看看詳細內容吧!

　　【摘要】 目的 樹立香連素片的質量控制規范。辦法 采用薄層色譜法鑒別香連素片中的木香;采用高效液相色譜法測定香連素片中鹽酸小檗堿的含量。后果 在薄層色譜中檢出了木香;鹽酸小檗堿的進樣量在0.0378～0.378 μg范圍內呈良好的線性關系(r=0.999 7)，均勻回收率爲101.49%，RSD爲1.97%(n=6)。結論 本辦法專屬性強、精確、重現性好，可作爲香連素片的質量控制規范。

　　【關鍵詞】 香連素片;木香;薄層色譜法;鹽酸小檗堿;高效液相色譜法

　　香連素片是廣東萬年青制藥無限公司的產品，具有清熱燥濕、行氣止痛的成效，臨床用于干冷型痢疾、里急后重、腹痛泄瀉。其處方爲木香500 g、鹽酸小檗堿75 g。原藥品規范[1]鑒別木香用試管反響，鹽酸小檗堿的含量用紫外分光光度法測定，辦法專屬性較低且影響要素多。本文采用薄層色譜法鑒別木香、高效液相色譜法測定鹽酸小檗堿的含量，后果標明操作簡便、精確、反復性好，爲該種類的質量規范進一步修訂提供了根據。

　　一、儀器與試藥

　　1.1 試藥

　　香連素片(批號：030801、030802、030803、040701、041002、050601、050802、060601、060602、060603)均爲廣東萬年青制藥無限公司產品;木香對照藥材(批號：921-9201)及鹽酸小檗堿對照品(批號：110713-200609)均購自中國藥品生物制品檢驗所;硅膠G預制板及硅膠G均由青島陸地化工廠消費;乙腈爲色譜純;其他試劑與試藥均爲剖析純。

　　1.2 儀器

　　LC?2010A高效液相色譜儀(日本島津), UV?2501PC紫外分光光度儀(日本島津), CQ?15A超聲波清洗器(上海躍進醫用光學器材廠)。

　　二、薄層鑒別

　　取本品2片，研成細粉，加三氯甲烷10 mL，超聲(功率120 W，頻率50 Hz)處置30 min，濾過，濾液稀釋至2 mL，作爲供試品溶液。另取木香對照藥材0.2 g、不含木香的陰性樣品，同法辨別制成對照藥材溶液及陰性對照溶液。照薄層色譜法實驗，汲取上述3種溶液各3 μL，辨別點于同一以羧甲基纖維素鈉爲黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷?環己烷(體積比5∶1)爲展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點明晰。置可見光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的地位上，顯相反顏色的斑點。陰性對照無攪擾，見圖1。

　　三、含量測定

　　3.1 色譜條件

　　色譜柱：phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5 μm) 活動相：以磷酸鹽緩沖溶液[0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.01 mol/L十二烷基磺酸鈉(體積比1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(體積比60∶40)，用磷酸調理pH值至3.0爲活動相;流速：1.2 mL/min，檢測波長：266 nm，柱溫：室溫，進樣量：10 μL，實際塔板數不低于1500。

　　3.2 溶液的制備

　　3.2.1 對照品溶液的制備

　　取鹽酸小檗堿對照品過量，精細稱定，加乙醇制成每1 mL含120 μg的溶液，作爲對照品溶液。

　　3.2.2 供試品溶液的制備

　　取本品20片，精細稱定，研細，精細稱取過量(約相當于鹽酸小檗堿60 mg)，置索氏提取器中，加鹽酸?甲醇(體積比1∶100)過量，加熱回流提取至提取液無色，將提取液(必要時稀釋)移至50 mL量瓶中，用大批鹽酸?甲醇(1體積比∶100)的混合液洗濯容器，洗液并入提取液中，并濃縮至刻度，搖勻，精細量取1 mL，置10 mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。

　　3.2.3 陰性對照溶液的制備

　　依照本品的處方、制法制備短少鹽酸小檗堿的模仿樣品，按“3.2.2”項辦法制成陰性對照溶液。

　　3.3 專屬性實驗

　　辨別取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照溶液，按上述色譜條件測定，后果陰性對照對鹽酸小檗堿測定無攪擾，闡明辦法專屬性強。后果見圖2。

　　3.4 線性關系的調查

　　精細稱取鹽酸小檗堿對照品過量，用乙醇溶解制成質量濃度爲37.8 μg/mL的溶液，辨別精細汲取1、2、4、6、8、10 μL注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定色譜峰面積，以進樣量(m)爲橫坐標，色譜峰面積積分值(Y)爲縱坐標，繪制規范曲線，經線性回歸，得線性回歸方程爲Y=2.88725×106m-5586.84，r=0.999 7，標明鹽酸小檗堿進樣量在0.0378～0.378 μg范圍內與色譜峰面積呈良好的線性關系。

　　3.5 波動性實驗

　　精細汲取同一批供試品溶液各10 μL，按上述色譜條件，每隔1 h測1次峰面積，后果標明鹽酸小檗堿在24 h內波動，RSD爲0.66%。

　　3.6 反復性實驗

　　取同一批樣品共6份，辨別按“3.2.2”項下辦法停止制備溶液，并按上述色譜條件測定鹽酸小檗堿的含量，后果RSD=0.90%,標明辦法重現性良好。

　　3.7 回收率實驗

　　精細稱取已知含量的樣品(批號：030802)共6份，辨別精細參加對照品過量，按“3.2.2”項下辦法制備溶液并按上述色譜條件測定鹽酸小檗堿的含量，計算參加量的回收率。后果見表1。表1 鹽酸小檗堿加樣回收率實驗(略)

　　3.8 精確度調查

　　以含量限制上限的50%爲范圍低限、以含量限制下限的150%爲范圍高限，調查測定范圍的精確度。

　　精細稱取已知含量的樣品(批號：030802)，按含量范圍高、低限折算取樣量，各6份，辨別精細參加對照品過量，按“3.2.2”項下辦法制備溶液并按上述色譜條件測定鹽酸小檗堿的含量，計算參加量的回收率。后果見表2。表2 精確度實驗后果(略)

　　3.9 樣品的測定

　　取10批樣品，辨別按“3.2.2”項下辦法制備溶液，辨別精細量取供試品溶液及對照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，并按上述色譜條件，測定鹽酸小檗堿的含量，后果見表3 。表3 樣品中鹽酸小檗堿的含量(略)

　　四、討 論

　　4.1 采用薄層色譜法鑒別木香時,辨別采用自制板及預制板同時展開、預均衡與未均衡的條件展開，層析后果標明：自制板與預制板的層析后果無差異，兩種展開條件均可檢出木香特征斑點，但以未均衡的條件展開，后果容易發生邊緣效應，故展開時預均衡10 min較好。

　　4.2 薄層層析的環境影響

　　辨別在冰箱、室溫、絕對濕度45%和75%的環境條件下展開，后果標明：在上述環境條件展開，均可檢出木香特征斑點，差別不大，故選用以室溫、絕對濕度45%～75%爲展開環境條件，操作簡便。

　　4.3 提取辦法的選擇

　　參照國度藥品規范[1]，供試品溶液的制備是經索氏提取后上氧化鋁柱洗脫，操作較繁瑣。我們對提取辦法停止了優化，只經索氏提取后間接測定，并與原提取辦法的HPLC測定后果作比照。后果標明：只經索氏提取與原提取辦法的測定后果分歧，因而樣品的提取采用索氏提取法。

　　4.4 測定波長的選擇

　　取對照品溶液， 在200～500 nm波長范圍內停止掃描，在349、266、231 nm均有最大吸收，經HPLC實驗比擬，鹽酸小檗堿在266 nm波長的峰面積值最大，故選擇檢測波長爲266 nm。

　　4.5 活動相的選擇

　　參考文獻[3,4]，采用磷酸鹽緩沖溶液[0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.01 mol/L十二烷基磺酸鈉(1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(60∶40),辨別用磷酸調理pH值至3.0、3.2、3.5爲活動相，經實驗，當活動相的pH值爲3.0時對照品及樣品的峰形對稱，反復性好，陰性對照無攪擾，故確定活動相爲磷酸鹽緩沖溶液[0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.01 mol/L十二烷基磺酸鈉(1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(60∶40)，用磷酸調理pH值至3.0。

　　4.6 耐用性調查

　　4.6.1 柱溫的調查

　　柱溫辨別爲室溫、40 ℃時，色譜峰的別離度、峰形及峰面積根本分歧，故以室溫作爲柱溫，操作較簡便。

　　4.6.2 流速的調查

　　辨別設定流速爲1.0、1.2及1.5 mL/min停止測定，后果標明：當流速爲1.0 mL/min時保存工夫太長，當流速辨別爲1.2及1.5mL/min時色譜峰的峰形及峰面積無甚差異，且前者的保存工夫短一些，故選擇流速爲1.2 mL/min。

　　4.6.3 色譜柱的調查

　　選用3種不同廠牌的色譜柱：phenomenex C18 (150 mm×4.60 mm,5 μm)、DiamonsilTM C18 (250 mm×4.60 mm,5 μm)和 Spherisorb C18 (250 mm×4.60 mm,5 μm)，測定同一批樣品(批號：060602)的含量，后果3種色譜柱測得含量的RSD=0.61%(n=2)，標明換用不同廠牌的色譜柱，均可失掉稱心的色譜圖，故本法的耐用性好。

　　【參考文獻】

　　[1]WS3—B—2572—97.國度藥品規范:衛生部藥品規范第十三冊[S].1997:140.

　　[2]國度藥典委員會.中華人民共和國藥典：2005年版一部[S].北京：化學工業出版社，2005：41.

　　[3]龐小雄，宋粉云，鐘兆健，等.HPLC法測定拈痛丸中鹽酸小檗堿的含量[J].廣東藥學院學報，2007,23(3):240-242.

　　[4]張宇烽，馬安霓，陳小玲，等.HPLC法測定芩連葛根片鹽酸小檗堿的含量[J].廣東藥學，2004，14(7)：83.

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