清開靈注射液對進行期尋常型銀屑病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T

          時間:2024-06-21 11:07:57 藥學畢業論文 我要投稿
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          清開靈注射液對進行期尋常型銀屑病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T

           【摘要】  目的  明確進行期尋常型銀屑病患者外周血T細胞及亞群是否存在異常;探討進行期尋常型銀屑病患者清開靈注射液治療前后外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞變化情況。 方法  40例患者隨機分為治療組和對照組,每組20例。治療組予清開靈注射液1ml/kg加入5%GS 250~500ml(糖尿病患者改用生理鹽水)中靜滴,每日1次;內服湯劑“土槐飲”(加減),1劑/d,分2次服;“加味黃芩膏”外用,2次/d。對照組予中藥湯劑“土槐飲”(加減)內服及“加味黃芩膏”外用。治療4周觀察2組的療效。治療開始和治療結束檢測患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞。選擇門診健康體檢者20例作為健康對照組。結果  2組在PASI積分、痊愈率、顯效率、總有效率方面差異無顯著性(P>0.05),在CD3+、CD4+、CD8+T細胞以及CD4+/CD8+改善方面治療組優于對照組(P<0.05)。結論  清開靈注射液對進行期尋常型銀屑病療效肯定,其在改善癥狀的同時亦能糾正患者外周血T細胞及其亞群的失衡狀態。

              【關鍵詞】  清開靈注射液  尋常型銀屑病  T細胞

              Effect of Qingkailing injection on CD3+,CD4+ and CD8+T cells in peripheral blood of patients with development psoriasis vulgaris

             

              【Abstract】  Objective  To definite the changes of CD3+,CD4+,CD8+ T cells in peripheral blood of patients with development psoriasis vulgaris (PV).To investigate effect of Qingkailing injection on CD3+、CD4+、CD8+ T cells in peripheral blood of patients with PV.Methods  40 cases of PV were observed,20 cases were chosen randomly as treating group and the others  as control group.20 cases were chosen randomly from the healthy persons as confnols.Patients of the treating group injected with Qingkailin Injection (1ml/kg adding into 5%GS 500ml,once a day);and orally took Tuhuaiyin decoction 200ml,twice a day; and locally applied Jiaweihuangqingao twice a day.Patients of  the control group only orally took Tuhuaiyin decoction 200ml twice a day;and locally applied Jiaweihuangqingao twice a day.All patients were treated for 4 weeks.Results  CD3+,CD4+ and CD8+T cells of peripheral blood of patients with PV were all improved in the treating group and the control group.Conclusion  Qingkailing injection has definitely effec on PV,and can correct the unbalance of CD3+,CD4+ and CD8+T cells in peripheral blood of patients with PV.

              【Key words】  Qinkailing injection  psoriasis vulgaris  T cells

                  銀屑病是T細胞介導的自身免疫性疾病[1]。銀屑病患者存在免疫學異常,文獻報道銀屑病患者外周血T細胞及其亞群的變化結論不一。清開靈注射液治療銀屑病有效。清開靈注射液治療銀屑病的機制,文獻多從學的角度進行闡述,現代實驗研究相對缺乏。本試驗探討進行期尋常型銀屑病患者清開靈注射液治療前后外周血CD3+、CD4+和CD8+T細胞變化,從免疫學角度試圖闡述清開靈注射液對進行期尋常型銀屑病患者的療效。

              1  資料與方法

              1.1  一般資料  本試驗共收集進行期尋常型銀屑病完整資料40例,按住院先后隨機分為治療組和對照組,每組各20例。另選擇門診健康體檢者20例,作為健康對照組。

              治療組:共20例,其中男12例,女8例;年齡最小者20歲,最大者55歲,平均年齡(33.95±10.92)歲,病程1年以內者2例,3年以內者7例,10年以內者9例,10年以上者2例;皮損形態:以點滴狀和混合型為主,PASI積分最小者10.9,最高者35,平均積分24.31±6.97。對照組:共20例,其中男9例,

              女11例;年齡最小者18歲,最大者44歲,平均年齡(31.95±8.23)歲;病程1年以內者1例,3年以內者5例,10年以內者10例,10年以上者4例;皮損形態:以點滴狀和混合型為多;PASI積分最小者11.6,最高者32.7,平均積分22.96±7.75。

              1.2  病例入選標準  上符合尋常型銀屑病診斷且為進行期;常規檢查除外其它器質性病變。入院期間及入院前1個月內未用皮質類固醇、免疫抑制劑、迪銀片和維A酸。

              1.3  檢測方法及藥物提供  (1) 抽取患者及健康體檢者外周靜脈血3ml,加肝素(20u/ml)抗凝,用淋巴細胞分離液制備淋巴細胞懸液,采用間接免疫熒光染色后再用流式細胞儀檢測法測定T細胞亞群。取已制備的淋巴細胞懸液各100μl,分別加入1∶100稀釋的抗CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體即OKT3、OKT4、OKT8單克隆抗體(美國Dako公司產)100μl,室溫孵育30min,加入1∶200稀釋的二抗(羊抗鼠IgG-FITC)100μl,室溫孵育30min,最后加PBS液2ml上機檢測。試驗中用PBS液分別代替一抗、二抗作陰性對照。采用美國BD公司生產的FACSCalibur型流式細胞儀檢測,每份標本檢測10000個細胞,計數熒光標記陽性的細胞,測量的數據輸入,用相應的軟件程序進行資料處理,輸出數據結果,并進行t。(2) 清開靈注射液由山西太行藥業股份有限公司提供(批號:020301);“加味黃芩膏”由江蘇省中醫院制劑室提供;中藥湯劑“土槐飲”的中藥飲片由江蘇省中醫院中藥房提供。

              1.4  觀察指標和療效判定  (1)安全性檢測:血、尿、大便常規,肝、腎功能;(2)癥狀積分改變情況:采用PASI積分系統,衡量銀屑病皮損受累面積及嚴重程度,實驗開始及實驗結束各記錄1次PASI積分;(3)患者治療前后及健康對照者的T細胞及其亞群。

              1.5  學方法  全部數據資料采用統計學軟件 SPSS11.5軟件包進行統計學處理。計量資料用x±s表示,采用t檢驗,計數資料采用χ2檢驗。P<0.05認為差異有顯著性,P<0.01認為差異有非常顯著性,P>0.05認為差異無顯著性。

              2  結果

              2組治療前后經配對t檢驗,P<0.01,組間經t檢驗,P>0.05,差異無顯著性,見表1。

              表1  2組治療前后PASI積分比較  (x±s)

                                                

             治療組在痊愈率、顯效率和總有效率都高于對照組,但經χ2檢驗P>0.05,差異無顯著性,見表2。

                                                                     表2  2組療效比較  (例)

                                      注:痊愈率=痊愈/n×100%;顯效率=(痊愈+顯效)/n×100%;總有效率=(痊愈+
          顯效+好轉)/n×100%   





          表3  2組治療前后T細胞亞群變化情況  (x±s)

             
              2組治療前CD3+、CD4+、CD8+T細胞均明顯低于健康對照組(P<0.05),CD4+/CD8+明顯高于健康對照組(P<0.05),治療后2組CD3+、CD4+、CD8+T細胞均有提高,CD4+/CD8+比值下降,治療組優于對照組(P<0.05),見表3。

              3  討論

              中藥針劑清開靈注射液系在清代《溫病條辨》“安宮牛黃丸”基礎上由北京中大學研制的復方制劑。其主要藥物成分為:板藍根、金銀花、梔子、水牛角、珍珠母、黃芩苷、膽酸、豬去氧膽酸。清開靈注射液雖然不是為治療銀屑病而開發研制,該藥的主治病(證)中也沒包括銀屑病,但從該藥的藥物構成和功效來看,與銀屑病的病癥相吻合,從中的角度可用于銀屑病的治療。“土槐飲”和“加味黃芩膏”是江蘇省中醫院皮膚科常用治療銀屑病的2個方劑,“土槐飲”主要由土茯苓、生槐花及其它中藥加減變化組成,全方有清熱解毒、涼血活血的功效;“加味黃芩膏”系江蘇省中醫院院內制劑,主要由黃芩、枯礬等藥物組成,具有清熱解毒、消炎止癢功效。以上三方同用,具有清熱解毒、涼血活血、消炎止癢的功效,達到改善銀屑病的目的。

              本試驗提示進行期尋常型銀屑病患者,治療前外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞明顯低于健康對照組(P<0.05),治療后患者T細胞及其亞群隨患者的癥狀改善及PASI積分的降低而趨于正常,提示 T細胞參與了銀屑病的發病過程。從T細胞的正常生理可初步推測進行期尋常型銀屑病患者外周血變化的原因。Baker[2]認為在遺傳及其它因素的影響下,患者的T細胞在干細胞水平即有損傷,導致發育成熟后的外周血中T細胞及其亞群的變化。由于人體的T細胞各亞群均屬免疫調節細胞,在維持免疫調節平衡上起重要作用,Th與Ts 是相互制約,正常情況下保持動態平衡。CD8+T細胞通過對B細胞的直接抑制,抑制體液反應;又通過抑制CTL細胞使細胞免疫功能減弱,故當循環中的CD4+及CD8+T細胞由正常動態平衡狀態變為失衡狀態時,即可引起患者的細胞免疫和體液免疫功能的變化,導致免疫性疾病的發生。患者外周血T細胞及其亞群的變化也可能是由于T細胞被激活后,由外周血浸潤到皮損中,由此導致外周血T細胞及其亞群的變化。Gettib[3]等指出,當受到抗原刺激時,朗格漢斯細胞(Langerhans cell,LC)在攝取并加工處理抗原后向T淋巴結區遷移時逐漸分化為成熟的樹突狀細胞,在淋巴結的T淋巴細胞區激活幼稚的T細胞(naive T cells),被激活的T細胞由于趨化因子及其它因素的作用回到真皮,分泌一系列細胞因子,使角質形成細胞表達HLA-DR+抗原,同時造成炎癥和表皮增生。HLA-DR+角質形成細胞又激活其它T細胞,導致銀屑病皮損的發生和存在。

              本試驗顯示進行期尋常型銀屑病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞明顯低于健康對照組(P<0.05),CD4+/CD8+比值高于健康對照組(P>0.05),但這一變化是銀屑病的繼發性改變,還是銀屑病的病因之一,目前還不清楚。因此銀屑病患者外周血T細胞及其亞群變化的機制也尚未完全清楚。本試驗治療組和對照組經4周治療,2組患者病情明顯好轉、PASI積分下降,患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞以及CD4+/CD8+比值趨于正常。經學處理,在 PASI積分改善、痊愈率、顯效率、總有效率方面治療組優于對照組,但2組間差異無顯著性(P>0.05);在CD3+、CD4+、CD8+T細胞以及CD4+/CD8+比值改善方面,治療組優于對照組(P<0.05),提示清開靈注射液對進行期尋常型銀屑病有效。至于2組在T細胞亞群以及CD4+/CD8+比值改善和PASI積分下降不一致的矛盾,一方面可能系銀屑病發病機制所致,即T細胞及其亞群的變化在先,皮損變化滯后;另一方面,可能與試驗選擇的樣本數量偏少有關。

              鑒于銀屑病病因和發病機制的復雜性,清開靈注射液對進行期尋常型銀屑病的療效可能通過多種途徑而獲得。初步推測有下面幾種可能的途徑:(1)對參與異常免疫反應的T細胞和抗原遞呈細胞的作用,抑制抗原遞呈細胞對抗原的識別、處理,抑制MHC復合物的表達,弱化T細胞活化所必需的第一、二信號的表達,進而影響T細胞活化,影響細胞因子及炎癥介質的表達;(2)直接抑制T細胞的活化,對T細胞活化的環節直接進行干預,干擾T細胞活化;(3)改變和/或抑制角質形成細胞膜表面分子的表達,封閉角質形成細胞表面相關受體,降低角質形成細胞對炎癥介質和/或T細胞的敏感性,抑制角質形成細胞過度增殖;(4)對細胞因子和炎癥介質的直接影響,包括改變其構型,阻止其與對角質形成細胞和T細胞的結合;(5)直接抑制角質形成細胞過度增殖;(6)通過其它更為復雜的途徑對T細胞、抗原遞呈細胞、角質形成細胞和炎癥介質施加影響,改善銀屑病。

              由于本試驗的患者均為住院患者,出于治療上的考慮,未設單純清開靈治療組以觀察療效,這是本試驗的不足之處。由于本試驗治療組和對照組都只有20例患者,健康對照組亦只有20例,故本試驗對進行期尋常型銀屑病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細胞的檢測結果是否穩定可靠尚不清楚,清開靈注射液對其治療結果是否具有廣泛性亦不能確定。由于T細胞及其亞群在皮損中亦有分布,且可能在銀屑病的發病機制中扮演重要角色,但由于多方面的原因未能檢測患者治療前后皮損中T細胞及其亞群的變化情況,以從多方面評價清開靈注射液對進行期銀屑病的治療效果。

              【參考文獻】

              1  Barker JN.Psoriasis as a T cell-mediated autoimmune disease.Hos med, 1998, 59(7):530-533.
              2  Baker BS,Fry L.The immunology of psoriasis.Br J Dermatol,1992,126:1.
              3  Gottlieb AB,Lifshibi B,Fu SM,et al.Detection of a gamma interferon-induced protein Ip-10 in psoriasis plaques.J Exp Med 1986,164(4):1013-1028.

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