復乳法制備雪蓮納米粒的研究

時間：2024-06-17 10:53:02 藥學畢業論文我要投稿

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復乳法制備雪蓮納米粒的研究

　　【摘要】目的利用雪蓮注射液中間體為原料，制備雪蓮納米粒，以提高患者對雪蓮用藥的順應性和達到緩釋作用。方法以復乳法制備雪蓮納米粒，雪蓮原料藥溶解于乙二醇中作為內水相，聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)溶解在二氯甲烷-丙酮(2∶1)的混和溶劑中作為油相，加入乳化劑形成W/O型初乳后以蒸餾水作為外水相在乳化劑作用下形成W/O/W型復乳納米溶液。結果納米粒的平均粒徑在134 nm;Zeta電位為-8.06;包封率為42.83%，載藥量為2.17%;12 h體外釋放39.57%。結論復乳法能夠得到性質穩定和具有緩釋功能的雪蓮納米粒。

復乳法制備雪蓮納米粒的研究

　　【關鍵詞】雪蓮; PLGA 納米粒; 復乳法; 緩釋

　　Abstract：ObjectiveTo prepare saussurea nanoparticles by using of saussurea injection intermediate so to improve the patients’ compliance and release slowly. MethodsMultiple emulsion method was used to prepare the saussurea nanoparticles. Saussurea injection intermediate dissolved in ethylene glycol as internal water phase, PLGA dissolved into the mixed solution that dichloromethane ∶acetone was 2∶1 as oil phase, adding emulsifier to form W / O type primal emulsion, then add the primal emulsion to the distilled water contain emulsifier to form W/O/W type multiple emulsion. ResultsThe particles mean size of the best prescription of the nanoparticles was 134 nm, the drug loading was 42.83%, and encapsulation ratio was 16.08%. Vitro release rate was 39.57% in 12 hours. ConclusionThe stable and slow-released saussurea nanoparticles can be prepared by multiple emulsion method.

　　Key words：Saussurea; PLGA nanoparticles; Multiple emulsion method; Slow-release

　　雪蓮注射液的主要成分包括黃酮、多糖和生物堿類。其中黃酮類成分是雪蓮抗炎止痛的主要成分，能夠促進腎上腺皮質激素的合成，不但能顯著提高小鼠免疫功能，對抗風濕性關節炎[1]，還具有抗癌、解痙、降壓和平喘作用[2，3]。生物堿能夠收縮血管，改變血管通透性從而起到強心、抗炎抗風濕和鎮痛作用。多糖類成分則具有消除自由基、抗疲勞作用，并且能夠興奮子宮平滑肌，治療婦女小腹冷痛[1]。納米中藥作為中藥現代化的重要手段之一，為藥物在機體內的吸收和發揮作用提供了更為廣泛的選擇，賦予傳統中藥以新的功能，如緩釋、增強靶向性、豐富給藥途徑、提高生物利用度、降低毒副作用等[4]。本文利用包含雪蓮有效成分的雪蓮注射液中間體為原料藥，將傳統的注射液改為復乳型納米溶液，為制成順應性更高的劑型提供技術支持。

　　1 材料與儀器

　　1.1 試劑雪蓮原料藥(雪蓮注射液的中間體，新疆民族藥中藥研究所提供);聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA，50/50，M=15000，山東岱罡生物公司);蘆丁標準品(中國藥品生物制品鑒定所);甲醇(上海凌峰化學試劑有限公司)為色譜純;氫氧化鈉、磷酸二氫鉀吐溫-80、司班-80(上海醫藥集團上海化學試劑公司)、二氯甲烷、丙酮、乙二醇、甲醇、乙腈等(國藥集團化學試劑有限公司)均為分析純。

　　1.2 儀器BS124S 電子天平：賽多利斯科學儀器(北京)有限公司; SPD-20A 島津高效液相色譜儀：日本島津公司;布魯克海文激光粒徑儀Zeta PLUS-90：美國布魯克海文儀器公司;GG-17旋轉蒸發儀：上海大研儀器有限公司;TGL-16C高速臺式離心機：上海安亭科學儀器廠;電鏡：JEM-2010/INCA OXFORD, 日本。

　　2 方法[5，6]

　　2.1 納米粒的制備稱取10 mg雪蓮注射液中間體超聲溶解于1 ml乙二醇中，為內水相，稱取33.9 mg PLGA加入燒杯中，加入2∶1的二氯甲烷-丙酮至重量為2.56 g，作為油相，加入司班-80 0.25 g，吐溫-80 0. 50 g，在油相中加入攪拌子，在磁力攪拌器上高速攪拌使油相和乳化劑混合均勻，然后用注射器抽取0.3 ml內水相緩緩滴加到油相中,3 000 r/min攪拌形成具有藍色乳光的W/O型初乳。稱取吐溫-80 0.65 g，加入80 ml蒸餾水中作為外水相，在乳化劑作用下將制得的W/O型初乳滴入其中，900 r/min攪拌制得W/O/W復乳型納米溶液。最后將制得的納米溶液在旋轉蒸發儀上旋蒸，去除有機溶劑。

　　2.2 粒徑測量取適量雪蓮納米粒膠體分散體系加去離子水稀釋10倍,用激光散射粒度測定儀測定其粒徑平均大小。

　　2.3 Zeta電位將稀釋10倍的納米溶液靜置1 h,用Zeta電位儀測定其電位，平行測定6次。

　　2.4 透射電鏡實驗(TEM)在經透射電鏡掃描以前，對納米溶液應進行處理：配制2%的磷鎢酸溶液，將納米溶液滴加在銅網上后，待表面烘干，滴加1～2滴2%的磷鎢酸溶液進行染色，再在燈下將所制樣品徹底烘干后進樣觀察。

　　2.5 載藥量、包封率的測定采用HPLC法對納米粒的載藥量和包封率進行測定。根據雪蓮的有效成分采用蘆丁(Rutin)作為標準品，以黃酮類成分的含量反映藥物的含量。使用迪馬C18反相色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)在356 nm波長下以甲醇：0.1%磷酸水溶液5∶5為流動相[7];流速1ml/min。檢測得蘆丁的保留時間是4.86 min。取所制得的納米溶液1 ml，用0.1μm微孔濾膜濾去納米粒，濾液測定得游離藥物的量WF，1 ml納米溶液超聲破壞30 min,加4倍甲醇沉淀PLGA，10 000 r/min離心30 min, 進樣測定所得濃度×5為藥物總量WT。每毫升納米溶液凍干后質量為WN，每毫升納米溶液中藥物的投入量為WD。按下式計算包封率、載藥量。包封率(%)=(WT-WF)/ WT載藥量(%)= (WT-WF) /WN

　　2.6 體外釋放實驗[8，9]本實驗根據2005版《中國藥典》配制磷酸鹽緩沖液PBS (pH=7.4)作為釋放介質，考察雪蓮納米粒的體外釋藥曲線。剪取10cm長的透析袋，用沸水煮5～10 min,再用蒸餾水沖洗干凈。取納米溶液6 ml, 加12 ml釋放介質，轉入透析袋中，檢查確保不漏液。將透析袋置于盛有70 ml釋放介質(PBS)燒杯中，加攪拌子 37℃恒溫50 r/min恒速磁力攪拌。在0，2 ，4 ，6 ，8 ，10 ，12 ，24 h后從透析袋外取溶液1.5 ml，同時補充相同體積的釋放介質。將取出的樣品進行HPLC檢測，計算其中藥物含量。配制相同藥物濃度的雪蓮原料藥的PBS溶液，按同樣方法測量釋放速率。

　　3 結果

　　3.1 納米粒的制備和形態考察本實驗采用復乳法制備雪蓮納米粒，主要以粒徑及包封率為表征參數，考察乳化劑和油相的用量對納米粒形成的影響。

　　3.1.1 納米粒的處方優化處方優化以能形成穩定、大小適度的納米粒和較高的藥物包封率為前提，主要從乳化劑的種類和用量、水油相之比等納米粒形成的關鍵步驟來篩選優化處方。見表1～3。表1 內水相乳化劑的用量對納米粒成型的影響　表2 二氯甲烷-丙酮的體積比對鈉米粒成型及包封率的影響·　表3 油相(二氯甲烷-丙酮)的量對納米粒成型的影響。

　　3.1.2 粒徑測定粒徑，測定結果見圖1。納米粒平均粒徑為134.6 nm。圖1 處方優化后制備成納米粒的粒徑分布

　　3.1.3 Zeta電位用Zeta電位儀測定其電位，測得平均Zeta電位為-8.06。說明納米溶液較穩定。

　　3.1.4 透射電鏡實驗(TEM)用透射電鏡觀察到納米粒的形態。見圖2。圖2 優化后處方制備納米粒的電鏡圖　由電鏡照片看出納米粒形態為類球形,表面較光滑,大小均勻,納米粒之間基本無黏連。

　　3.2 載藥量、包封率和藥物利用率包封率(%)=WT-WF/WT=42.83%載藥量(%)=(WT-WF)/WN= 2.17%

　　3.3 體外釋放實驗原料藥和納米粒的體外釋放實驗結果如圖3所示：圖3 雪蓮原料藥和雪蓮納米粒體外釋放曲線由HPLC測定，計算納米粒溶液和雪蓮原料藥的體外累積釋放率得知，雪蓮原料藥體外釋放在2 h 達到82.14%，釋放速度很快。而在相同條件下，納米粒溶液在2 h時釋放為2.08%，12 h后達39.57%，釋放速度減緩，說明所制得納米粒能達到較好的緩釋效果。

　　4 討論

　　根據PLGA和雪蓮原料藥的理化特性，選用復乳法制備聚合物納米粒是行之有效的方法。本實驗通過改變油相成分及用量、乳化劑用量從而制備得到理化性質較好的納米粒溶液。

　　通過體外實驗的考察，雪蓮納米粒與雪蓮原料藥相比能達到緩釋作用，但體內是否能提高生物利用度，還有待于進一步考察。

【參考文獻】

　[1] 趙莉,王曉玲. 新疆雪蓮的化學成分藥理作用及其臨床應用[J]. 西南民族大學學報(自然科學版),2003,29(4):424.

　　[2] 陳玉珍,李鳳蘭. 藥用資源植物雪蓮化學成分及藥理作用[J]. 中國野生植物資源，2005,24(3):1.

　　[3] 李君山,蔡少青. 雪蓮花類藥材的化學和藥理研究進展[J]. 中國藥學雜志，1998,33(8):449.

　　[4] 劉麗芳，張陽德. 納米中藥研究與中藥現代化[J]. 中國現代醫學雜志，2009，19(8):1186.

　　[5] 董鑫. PLGA 載多柔比星磁性納米微球的制備與表征 [J]. 常熟理工學院學報(自然科學版),2008,22(10): 43.

　　[6] Bergson F.OLIVEIRA, Ana E.R.FERREIRA, Silvia L.FIALHO & Armando SILVA-CUNHA.(2009) Lat.Am.J.Pharm.28:409.

　　[7] 張慧，趙翔. HPLC法測定復方雪蓮膠囊中蘆丁的含量[J]. 光明中醫，2009,24(2)：214.

　　[8] 黃義，李新中,雷鵬，等. 黃芩苷固體脂質納米粒體外釋放研究[J]. 中國藥房，2009,20(9)：646.