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倉(cāng)鼠胰腺癌原位模型的建立及生物學(xué)特性
【關(guān)鍵詞】 ,胰腺腫瘤Establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer and its biologic characteristics
【Abstract】AIM: To establish an orthotopic model of hamster pancreatic cancer and to analyze its biologic characteristics. METHODS: Pancreatic cancer cell line pDHAM1 of hamster was inoculated under pancreatic membrane. At 7th, 14th, 21st, and 28th day, a group of 10 animals were sacrificed to observe the growth of orthotopic cancer, lymph nodes metastasis, liver metastasis and the quantity and quality of ascites. RESULTS: Orthotopic model of hamster pancreatic cancer had a high survival rate (95%) and grew rapidly. The orthotopic tumors were measured (16±6), (173±44), (369±87), (974±226) mm3 respectively at the 7th, 14th, 21st and 28th day. At the 21st day, cancer cells were observed in lymphatic capillaries and metastasis in some lymph nodes and hydremic ascites was detected. At the 28th day, the positivity rate of lymph nodes and the amount of bloody ascites increased. Liver metastasis was detected in some of the hamsters. CONCLUSION: The establishment of orthotopic model of hamster pancreatic cancer cells pGHAM1 is simple and easily copied, and maintains the biologic characteristics of pancreatic carcinoma, which is an ideal research model of pancreatic carcinoma.
【Keywords】 pancreatic neoplasms; disease models, animal; mesocricetus
【摘要】目的： 建立倉(cāng)鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物學(xué)特性. 方法： 將倉(cāng)鼠胰腺癌細(xì)胞株pGHAM1接種于倉(cāng)鼠胰腺背膜下，分別于第7, 14, 21, 28日各剖殺10只，肉眼及光學(xué)顯微鏡下觀察原位腫瘤的生長(zhǎng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝轉(zhuǎn)移，同時(shí)觀測(cè)腹水量. 結(jié)果： 倉(cāng)鼠胰腺癌原位模型成活率達(dá)95%，生長(zhǎng)迅速. 接種后第7， 14， 21， 28日原位腫瘤大小分別為（16±6），（173±44），（369±87），（974±226） mm3. 第21日，毛細(xì)淋巴管內(nèi)可見(jiàn)癌細(xì)胞團(tuán)，部分淋巴結(jié)有癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，可見(jiàn)少量淡血性腹水. 第28日，淋巴結(jié)陽(yáng)性率進(jìn)一步增加，可見(jiàn)血性腹水，量明顯增多；部分倉(cāng)鼠發(fā)生了肝轉(zhuǎn)移. 結(jié)論： 倉(cāng)鼠胰腺癌細(xì)胞株 pGHAM1原位模型建立方法簡(jiǎn)便，易復(fù)制，而且腫瘤保持了胰腺癌的生物學(xué)特性，是理想的胰腺癌研究模型.
【關(guān)鍵詞】 胰腺腫瘤；疾病模型，動(dòng)物；金倉(cāng)鼠
0引言
胰腺癌是一種惡性程度高、預(yù)后極差的腫瘤［1］. 其原因是胰腺癌發(fā)病隱匿，很難早期診斷，而即便早期診斷，部分患者也已經(jīng)發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移、腹膜播散或者局部復(fù)發(fā)［2］. 基于為胰腺癌研究提供一個(gè)腫瘤的試驗(yàn)系統(tǒng)目的，已有大量胰腺癌動(dòng)物模型建立，但很多是裸鼠模型. 在腫瘤研究方面，由于裸鼠沒(méi)有正常的免疫系統(tǒng)，其發(fā)病機(jī)制可能與人有所不同［3］. 而敘利亞金色倉(cāng)鼠在形態(tài)學(xué)、生物學(xué)以及免疫學(xué)等方面與人相似. 我們擬建立倉(cāng)鼠胰腺癌原位模型，并研究其生物學(xué)特性.
1材料和方法
1.1材料
雌性敘利亞金黃倉(cāng)鼠40只，4～5周齡，純近交系，體質(zhì)量40～50 g，購(gòu)自中國(guó)蘭州生物制品研究所. 飼養(yǎng)條件：溫度（22±3）℃，相對(duì)濕度為（40±5）%，光/暗周期為12 h/12 h，按照標(biāo)準(zhǔn)食物喂養(yǎng)，自由飲水；DMEM培養(yǎng)液為Gibcol BRL產(chǎn)品；胎牛血清購(gòu)自杭州四季青生物工程公司.
1.2方法
1.2.1倉(cāng)鼠胰腺癌細(xì)胞株pGHAM1的建立用甲硝二胺誘導(dǎo)敘利亞金黃色倉(cāng)鼠胰腺導(dǎo)管癌［4］. 腫瘤組織用剪刀剪成1 mm×1 mm×1 mm并用套針植入倉(cāng)鼠肩胛區(qū)皮下，6～8 wk后處死動(dòng)物，切除腫瘤自治后反復(fù)繼代種植，第8次種植后切除腫瘤組織，用0.5 g/L的胰蛋白酶消化，37℃下EDTA處理10 min, 1000 r/min離心10 min，收集細(xì)胞，于含100 mL/L胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)，并加 100 U/L青霉素鏈霉素，100 mg/L卡那霉素以及100 mg/L兩性霉素B，反復(fù)傳代培養(yǎng)60代，建立pGHAM1細(xì)胞株.
1.2.2倉(cāng)鼠胰腺癌原位模型的建立PGHAM1細(xì)胞株于DMEM培養(yǎng)液中穩(wěn)定傳代5~6代. 觀察細(xì)胞增殖旺盛時(shí)終止培養(yǎng)，用無(wú)血清DMEM培養(yǎng)液制備細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度至1×1010/L，備用. 以60 mg/kg腹腔注射戊巴比妥鈉，取腹部正中切口，牽出胰腺，于脾門(mén)較寬大處胰腺背膜下注射1×106/L PGHAM1細(xì)胞懸液后常規(guī)關(guān)腹. 于術(shù)后7, 14, 21, 28 d分別剖殺10只. 切除原位腫瘤，用測(cè)徑器測(cè)量腫瘤大小，按公式V=π/6×長(zhǎng)×寬×高計(jì)算腫瘤體積，同時(shí)觀察腹水的質(zhì)與量、有無(wú)淋巴結(jié)、大網(wǎng)膜、壁層腹膜及肝臟轉(zhuǎn)移.
1.2.3病理學(xué)檢查切除大網(wǎng)膜，平鋪在蠟片上，“卷席法”處理大網(wǎng)膜標(biāo)本；40/L甲醛固定原位腫瘤、壁層腹膜、肝臟及可疑淋巴結(jié)，石蠟包埋切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察.
2結(jié)果
2.1原位腫瘤及轉(zhuǎn)移情況接種后第7日，可見(jiàn)胰內(nèi)原發(fā)灶大�。�16±6） mm3,
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