淺析室內(nèi)空氣微生物不同采樣方法的檢測論文
近年來，SARS、禽流感等疾病的暴發(fā)和流行，使人們在關(guān)注室內(nèi)空氣物理性與化學(xué)性污染的同時(shí)也越發(fā)意識到微生物污染的嚴(yán)重性。如今越來越多在寫字樓中工作的上班族們也常常出現(xiàn)不良建筑物綜合癥（sick building syndrome，SBS），目前雖然對SBS的發(fā)病機(jī)理尚無明確定論，但已有多篇研究報(bào)道證明其與室內(nèi)生物氣溶膠污染密切相關(guān)。目前，室內(nèi)空氣微生物污染日益受到關(guān)注，已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)問題之 一 。 國 家 標(biāo) 準(zhǔn)《公 共 場 所 衛(wèi) 生 標(biāo) 準(zhǔn)》（GB9663-9673-1996、GB l6153-1996）及《室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（GB/T 18883-2002）中對室內(nèi)空氣微生物檢測方法做出了明確規(guī)定，采樣方法可分為自然沉降法和氣流撞擊法。在實(shí)際應(yīng)用中，往往是根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件選擇采樣方法，不同采樣方法之間存在明顯的差異。因此，我們于2012年4—6月在實(shí)驗(yàn)室條件下觀察了不同空氣微生物采樣方法對檢測結(jié)果的影響，為在實(shí)際工作中選擇合理的空氣微生物采樣方法提供科學(xué)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 儀器及試劑 液體撞擊式玻璃采樣器（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供），F(xiàn)A-1型多級撞擊式空氣微生物采樣器（遼陽新技術(shù)研究所提供），直徑9 cm平皿，普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（北京生化試劑三廠）。
1.2 采樣地點(diǎn) 采樣在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，面積約 40 m2，室溫22～28℃、相對濕度45%～65%。采用對角線布點(diǎn)方式布點(diǎn)設(shè)3個(gè)采樣點(diǎn)，采樣高度為1.5 m，模擬人群呼吸帶高度。自然沉降法、液體撞擊法及固體培養(yǎng)基撞擊法同時(shí)進(jìn)行。
1.3 采樣方法
1.3.1 自然沉降法 將普通營養(yǎng)瓊脂平皿放置于各采樣點(diǎn)，打開平皿蓋暴露5 min，采樣后的平皿置于恒溫箱內(nèi)36℃培養(yǎng)48 h后觀察結(jié)果�？諝庵屑�(xì)菌總數(shù)（cfu/m3）=N×50 000（/A×T）。N表示所有平皿菌落數(shù)，T 表示平皿暴露時(shí)間（min），A 表示平皿面積（cm2）。
1.3.2 液體撞擊法 液體撞擊法采用液體撞擊式采樣器，采樣前將滅菌的采樣液（生理鹽水）10.0 ml加入到液體撞擊式采樣器玻璃吸收管中，以1.0 L/min流量采集空氣20 min。采樣后以無菌操作取采樣液1.0 ml加入到滅菌平皿中，再傾注融化并冷卻至45℃的普通營養(yǎng)瓊脂，每管采樣液接種2個(gè)平皿，置于恒溫箱內(nèi)36℃培養(yǎng) 48 h 后觀察結(jié)果�？諝庵屑�(xì)菌總數(shù)計(jì)算公式：N×10 000（/Q×T）。N表示接種平皿平均菌落數(shù)，T表示采樣時(shí)間（min），Q表示采樣流量（L/min）。
1.3.3 固體培養(yǎng)基撞擊法 固體培養(yǎng)基撞擊法采用FA-1 型撞擊式空氣微生物采樣器，以 28.3 L/min 流量采集空氣10 min。采樣后的平皿同時(shí)置于恒溫箱內(nèi)36℃培養(yǎng) 48 h 后觀察結(jié)果�？諝庵屑�(xì)菌總數(shù)（cfu/m3）=N×1 000（/Q×T）。N表示所有平皿菌落數(shù)，T表示采樣時(shí)間（min），Q表示采樣流量（L/min）。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 Spss 17.0 軟件對不同采樣方法測得的細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行方差分析，對不同采樣方法測得的空氣微生物超標(biāo)率采用配對四格表卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。
2 結(jié) 果
2.1 不同采樣方法的測定結(jié)果 3 種不同采樣方法中，自然沉降法所測細(xì)菌總數(shù)結(jié)果相對較高，固體培養(yǎng)基撞擊法最低，3種不同方法的結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=16.508，P<0.05）；進(jìn)一步兩兩比較，差異亦均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（由于各組方差不齊，故采用Dunnett T3法進(jìn)行兩兩比較），見表1。
表1 不同采樣方法測得的空氣中細(xì)菌總數(shù)
2.2 不同評價(jià)方法對自然沉降法結(jié)果判定的影響以直接計(jì)數(shù)（cfu/皿）評價(jià)時(shí)超標(biāo)率為17.07%，以經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算（cfu/m3）評價(jià)時(shí)超標(biāo)率為41.46%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.05，P<0.05），見表 2。
表2 不同評價(jià)方法對自然沉降法結(jié)果判定的影響
2.3 自然沉降法與固體培養(yǎng)基撞擊法超標(biāo)率一致性分析 自然沉降法超標(biāo)率為17.07%，固體培養(yǎng)基撞擊法超標(biāo)率為24.39%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.571，P>0.05），見表 3。
表3 自然沉降法與固體培養(yǎng)基撞擊法檢測結(jié)果比較
2.4 液體撞擊法與固體培養(yǎng)基撞擊法超標(biāo)率一致性分析 液體撞擊法超標(biāo)率為31.71%，固體培養(yǎng)基撞擊法超標(biāo)率為24.39%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.364，P>0.05），見表 4。
表4 液體撞擊法與固體培養(yǎng)基撞擊法超標(biāo)情況
3 討 論
固體培養(yǎng)基撞擊法所使用的采樣裝置是多級撞擊式空氣微生物采樣器，該儀器不僅能高效率捕獲空氣中的'微生物顆粒，還能將其按大小分級，很好地模擬了人類呼吸道的解剖結(jié)構(gòu)和空氣動力學(xué)特性，被認(rèn)為是目前各類空氣微生物采樣方法中最為合理、準(zhǔn)確和科學(xué)的方法，但該設(shè)備價(jià)格昂貴，在實(shí)際監(jiān)測中受到一定限制。自然沉降法簡便易行，尤其在基層被普遍采用，但該法容易受氣流、污染程度、微生物顆粒物大小等諸多采樣環(huán)境條件的影響，特別是經(jīng)驗(yàn)公式的推導(dǎo)依據(jù)及普適性也被質(zhì)疑，所以現(xiàn)行室內(nèi)空氣微生物標(biāo)準(zhǔn)中雖然仍有沉降法，但其評價(jià)方式改為直接計(jì)數(shù)法（cfu/皿）。自然沉降法以經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算（cfu/m3）評價(jià)時(shí)結(jié)果明顯偏高，而采用直接計(jì)數(shù)法（cfu/皿）評價(jià)空氣微生物污染超標(biāo)情況時(shí)，其結(jié)果與固體培養(yǎng)基撞擊法基本一致。液體撞擊法與固體培養(yǎng)基撞擊法原理基本相似，雖然準(zhǔn)確性也較高，但與固體培養(yǎng)基撞擊法相比仍存在很多缺點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)液體撞擊法采樣流量為1.0 L/min，而固體培養(yǎng)基撞擊法可高達(dá)28.3 L/min。盡管液體撞擊法與固體培養(yǎng)基撞擊法在評價(jià)空氣微生物污染超標(biāo)情況時(shí)，其結(jié)果與固體培養(yǎng)基撞擊法基本一致，但從理論上說，固體培養(yǎng)基撞擊法的檢測結(jié)果顯然更為準(zhǔn)確可靠。
固體培養(yǎng)基撞擊法是目前評價(jià)室內(nèi)空氣微生物污染狀況最理想的采樣法，自然沉降法和采用直接計(jì)數(shù)（cfu/皿）及液體撞擊法的檢測結(jié)果也較可靠。自然沉降法簡便易行且方便經(jīng)濟(jì)，而液體撞擊法由于其裝置連接及檢測過程較繁瑣，應(yīng)用受到一定限制；但在沒有多級撞擊式空氣微生物采樣設(shè)備，而要較精確測定空氣中微生物數(shù)量時(shí)，也還有著廣泛地應(yīng)用領(lǐng)域。
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